Мога ли да оцветя понсо след блокиране?

Това е въпрос, който нашите експерти получават от време на време. Сега имаме пълното подробно обяснение и отговор за всеки, който се интересува!

Попитан от: Ханк Дули
Резултат: 4,6/5(35 гласа)

Макар че оцветяването на Ponceau не трябва да блокира свързването на антитялото , можете да направите снимка на оцветената мембрана от Ponceau и след това да отстраните Ponceau, като накиснете в голям обем вода за няколко минути. Не се тревожи за това. Оцветяването с Ponceau е само за проверка на ефективността на трансфера.

Можете ли да използвате петна Ponceau след блокиране?

въпреки че Оцветяването на Ponceau не трябва да блокира свързването на антитялото , можете да направите снимка на оцветената мембрана от Ponceau и след това да отстраните Ponceau, като накиснете в голям обем вода за няколко минути. Не се тревожи за това. Оцветяването с Ponceau е само за проверка на ефективността на трансфера.

Защо някой би използвал Ponceau S вместо AB HRP color development или Coomassie?

Протоколът за оцветяване с Ponceau S отнема около 20 минути нетоксичен , и по-нежно решение от Coomassie Brilliant Blue. Разтворът за оцветяване на Ponceau S не фиксира протеина, позволявайки Western blot анализ след оцветяване, което е друго ключово съображение.

Можете ли да използвате повторно байц Ponceau?

Потопете трансферната мембрана в разтвор на оцветител Ponceau S с леко разбъркване за 5 минути. 2. Декантирайте петното и изплакнете мембраната няколко пъти с H_двеO докато се видят протеиновите ленти. Не използвайте повторно петното ; това ще доведе до невъзпроизводими резултати поради изчерпване на багрилото след първата употреба.

В какъв цвят Ponceau оцветява протеините на мембраната?

В този протокол нитроцелулозната или PVDF мембрана се изплаква с ултрачист H_двеO след трансфер на протеини. Багрилото Ponceau S се прилага като киселинен воден разтвор и протеините върху мембраната се оцветяват с червен цвят .

Western Blot - оцветяване с Ponceau S

Намерени са 37 свързани въпроса

Какъв е смисълът от блокиране на мембраната при 5% мляко?

Блокирането е много важна стъпка от уестърн блотинг , тъй като предотвратява неспецифичното свързване на антителата към мембраната. Блокирането често се прави с 5% BSA или обезмаслено сухо мляко, разредено в TBST, за да се намали фона.

Мога ли да боядисвам гел с Ponceau?

Ти мога оцветете вашата мембрана, а не вашия гел с Ponceau S. Ако искате да визуализирате вашите протеини в гела, трябва да опитате Coomasie Blue.

Какво показва петното от Понсо?

Ponceau S е бърз и обратимо оцветяване за откриване на протеинови ленти върху Western blot мембрани и може да се използва с мембрани от PVDF, нитроцелулоза и целулозен ацетат*. ... Тъй като оцветяването с Ponceau-S е обратимо, то позволява по-нататъшно имунологично откриване.

Как се прави разтвор на Ponceau S?

Приготвяне на разтвор за оцветяване на Ponceau S

1. За приготвянето на 500 ml разтвор за оцветяване на Ponceau S добавете 25 ml ледена оцетна киселина към 400 ml дестилирана вода.
2. Добавете 0,5 g тетранатриева сол на Ponceau S към получената по-горе оцетна киселина.
3. Разбъркайте сместа, за да се разтвори.
4. Допълнете разтвора до 500 ml с дестилирана вода.

Флуоресцира ли Ponceau?

Дори след щателно обезцветяване петното от Ponceau може да остави автофлуоресцентен остатък върху мембраната което увеличава фоновата флуоресценция.

Кое е по-чувствително Coomassie blue или Ponceau S?

Кумаси брилянтно синьо R250 и амидо черно 10B са по-чувствителни от Ponceau S^две. Въпреки това с Coomassie brilliant blue R250 фоновото оцветяване е високо и това петно ​​също не се отстранява лесно.

Защо Coomassie Blue се оцветява?

Кумаси синьо петно ​​е използвани за оцветяване на протеиновите ленти в полиакриламидни гелове . ... Въпреки това багрилото се свързва по-здраво с протеините, отколкото с матрицата на гела, така че впоследствие багрилото може да бъде отстранено само от свободните от протеини части на гела, като се използва подобен разтворител, в който багрилото е пропуснато. Това е съдбата.

Защо SDS се използва в Western blotting?

SDS обикновено се използва като буфер (както и в гела) в за да се даде на всички присъстващи протеини еднакъв отрицателен заряд , тъй като протеините могат да бъдат положително, отрицателно или неутрално заредени. ... Стъпката на гел електрофореза е включена в Western blot анализа за разрешаване на проблема с кръстосаната реактивност на антителата.

Какво представлява оцветяването с кумаси синьо?

Описание. Боите Coomassie blue са семейство багрила, обикновено използвани за оцветяване на протеини в SDS-PAGE гелове . Геловете се накисват в багрило и след това излишното петно ​​се елуира с разтворител („обезцветяване“). Това третиране позволява визуализиране на протеини като сини ленти на ясен фон.

Как оцветявате нитроцелулозна мембрана?

Материали

1. Поставете блот трансфер мембраната в пластмасова кутия. ...
2. Изплакнете с вода четири пъти по 5 минути.
3. Оцветете със SYPRO Ruby протеиново петно ​​за 15 минути. ...
4. Изплакнете с вода четири до шест пъти за нитроцелулоза и два до три пъти за PVDF за 1 минута всеки, след което изсушете на въздух.

Защо цапаме с Ponceau S?

Оцветяването с Ponceau S е a бърз и обратим метод на оцветяване, използван за откриване на протеинови ивици върху Western blot мембрани , мембрани от поливинилиден флуорид (PVDF), нитроцелулоза и целулозен ацетат. ... Петното Ponceau S е обратимо; това качество го прави полезен за по-нататъшно имунологично откриване.

Ponceau S токсичен ли е?

водосток S (6226-79-5)

Конкретна цел органна токсичност – еднократна експозиция Може да причини дразнене на дихателните пътища. Симптоми/ефекти след контакт с кожата : Изгаряния. Симптоми/ефекти след контакт с очите : Сериозно увреждане на очите. Симптоми/ефекти след поглъщане : Изгаряния.

Чувствителен ли е Ponceau към светлина?

*Забележка: Culvert S е чувствителен към светлина .

Как оцветявате среброто?

Сребърно оцветяване

1. Фиксирайте гела във фиксиращ разтвор (40% етанол, 10% оцетна киселина, 50% вода) за 30 минути.
2. Третирайте гела с разтвор за третиране на протеин (20% етанол, 5% оцетна киселина, 75% вода, 4 mg дитиотреитол) за 30 минути.
3. Изплакнете гела с 0,5% дихромат за 5 минути.
4. Измийте гела с вода за 5 минути.

Когато се използва върху мембрана Какво прави Ponceau S Как може да прави това?

Culvert S е отрицателно оцветяване, което се свързва с положително заредените амино групи на протеина . Той също така се свързва нековалентно с неполярни области в протеина. (Забележка: Ponceau S не е подходящ за използване с найлонови мембрани.) Разтворът за оцветяване на Ponceau S съдържа 0,1% Ponceau S (w/v) и 5,0% оцетна киселина (w/v).

Можете ли да прехвърлите след гел, оцветен с кумаси?

Нормалното оцветяване с кумаси изисква фиксиране на гела, така че няма да получите трансфер. Можете да оцветите своя гел след прехвърляне .

Каква е разликата между PVDF и нитроцелулозните мембрани?

PVDF мембраните имат по-висок капацитет за свързване на протеини от нитроцелулозата . Капацитетът на свързване с протеини на PVDF варира от 150-200 µg протеин/cm^двеа нитроцелулозата варира от 80-100 µg протеин/cm^две. Въпреки че PVDF има по-висок капацитет на свързване, това може да доведе до повишен фон при някои обстоятелства.

Кога ленти от протеини се прехвърлят към нитроцелулоза?

Въпрос: Прехвърлянето на протеин от електрофоретичен гел към нитроцелулозна мембрана е известно като. ° С) Western blotting техника се използва за трансфер на протеин от електрофореза с полиакриламиден гел (PAG) върху нитроцелулозна мембрана. Northern blotting се използва за трансфер на РНК и Southern blotting за ДНК трансфер ...

Измивате ли след блокиране?

Общи процедури за блокиране

Обикновено се извършва достатъчно промиване след етапа на блокиране, за да се отстрани излишният протеин, който може да попречи на откриването на целевия антиген. Въпреки това, много изследователи не се измиват след етапа на блокиране, защото разреждат първичните си антитела техния блокиращ буфер.